Prot. 1539 dd. 18/5/2020

Studio degli effetti dei principi attivi ed eccipienti proposti nel progetto su linee cellulari in grado di mimare la normale componente cellulare cutanea. Le attività richieste includono la valutazione dell’eventuale tossicità dei principi attivi e degli eccipienti nonché la capacità di influire sulla crescita e migrazione cellulare. Gli effetti sulla crescita cellulare verranno analizzati attraverso l’analisi del ciclo cellulare con la tecnica della doppia marcatura del DNA in citofluorimetria affiancata, per conferma, dalla conta diretta delle cellule. L’eventuale effetto sulla proliferazione cellulare verrà anche studiato a livello molecolare valutando l'espressione di diversi geni connessi con il ciclo cellulare mediante Western Blot e PCR quantitativa. L’eventuale effetti tossico diretto (necrosi) verrà studiato con il test della lattato deidrogenasi (LDH). L’induzione di apoptosi sarà valutata studiando la cascata delle Caspasi, il taglio della Poly-ADP-ribose polimerasi ed il test dell’annexin V in citofluorimetria. Infine, lo studio sugli effetti sulla migrazione avverrà mediante scratch test; le condizioni più promettenti verranno poi confermato mediante “modified Boyden chamber.